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Inertsil NH2色譜柱操作說明

更新時間:2024-09-19      點擊次數(shù):294

1.色譜柱信息

  Inertsi NH2液相色譜柱是在高純度硅膠基質(zhì)上鍵合氨丙基的色譜柱,正相分離模式適合用于維生素等脂溶性化合物的分離,如果用于HILIC分離模式,可以用于強(qiáng)極性至中等極性例如一些極性藥物、小生物分子的分離。Inertsil NH2液相色譜柱從硅膠基質(zhì)的合成,到化學(xué)處理和裝填后的性能檢測,都是在本公司嚴(yán)格的產(chǎn)品控制下進(jìn)行,因此不同批次的柱與柱之間具有優(yōu)異的重現(xiàn)性;通過獨有的裝填技術(shù)填裝的NH2柱柱床密度均一穩(wěn)定,從而確保色譜柱具有高柱效,目前NH2柱用于HILIC (親水性作用,用于反相系統(tǒng))模式分離的情況愈來愈多,在極性和親水性化合物如糖類、有機(jī)酸、有機(jī)堿、氨基酸、多肽水解物等的分離過程中,可作為改變柱選擇性和提高分辨率的分離工具。

  為了能長期保持Inertsil NH2液相色譜柱的優(yōu)越性能和正確的使用色譜柱,在使用色譜柱之前請仔細(xì)閱讀本說明書。

 

2.使用前的檢查與須知事項

●檢查包裝箱的外觀有無異常。

●打開包裝,檢查色譜柱的填料名稱、尺寸規(guī)格、連接形式是否相符。

●色譜柱中封存流動相為正己烷/乙醇=982,v/v

 

3.色譜柱填料規(guī)格

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4.色譜柱安裝與操作

  色譜柱在運輸過程中,兩端用堵頭密封。當(dāng)將色譜柱接入色譜儀器系統(tǒng)時,首先請確保系統(tǒng)中的溶劑和液相柱中封存溶劑是互溶的。如果不能互溶,請采用一種能夠與系統(tǒng)及色譜柱都能互溶的溶劑(e.g.異丙醇)對系統(tǒng)進(jìn)行充分過渡之后再將色譜柱連接到系統(tǒng)中,并注意流動相的方向要與柱上標(biāo)記的方向保持一致。 我公司提供的常規(guī)液相色譜柱標(biāo)準(zhǔn)接頭型式為

1/16英寸Waters接頭螺絲型(如下左圖) 同時還有耐高壓液相系統(tǒng)的UP(如下右圖) ( 目前NH2柱暫不提供UPLC)。如果需要其他接頭形式請另行咨詢。

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色譜柱連接好之后,請確認(rèn)無漏液現(xiàn)象之后再進(jìn)行后續(xù)操作。

  新的NH2柱是保存在正己烷/乙醇(982,v/v)的溶液中,在儲存和運輸過程中,硅膠填料可能會干涸,如果用于正相分離模式,正相柱的平衡時間一般較長,直接用正己烷/乙醇(982, v/v) 沖洗50倍柱體積活化,流速從0.1mL/min緩慢上升到最佳流速,然后用流動相平衡之后再進(jìn)樣分析;如果用在反相系統(tǒng)中分離,推薦用至少50倍柱體積異丙醇過渡(注意接色譜柱之前,用二通代替色譜柱連接系統(tǒng),用異丙醇將系統(tǒng)包含進(jìn)樣器部分徹底清洗,除水完全之后,再連接色譜柱),再用純的乙腈沖洗20倍柱體積對色譜柱進(jìn)行平衡,流速從0.1mL/min緩慢上升到最佳流速,然后用不含緩沖鹽的流動相進(jìn)行平衡20倍柱體積,再用流動相平衡,待壓力和基線穩(wěn)定之后,再進(jìn)樣分析。(如果在活化過程中即發(fā)現(xiàn)壓力和基線不正常時,請及時聯(lián)系我公司工程師及時處理。)

 

5.樣品與流動相

  為避免色譜柱堵塞,所有樣品及溶劑,包括緩沖溶液在內(nèi),在使用前必須用0.45 μm或者0.22 μm的濾膜過濾。在正相色譜中,固定相的水分含量常常是影響選擇性的關(guān)鍵因素,大部分溶劑都內(nèi)含有小部分的溶解水分(正己烷20℃水分含量是0.0111% w/w),如發(fā)現(xiàn)色譜柱保留性能發(fā)生變化,可用流動相低流速長時間充分平衡。

HILIC模式分離中,樣品溶劑需要含60-100%的有機(jī)溶劑,水的比例應(yīng)盡量小,推薦5%的水作為自動進(jìn)樣器的清洗液。適用于HILIC分離的緩沖鹽體系為甲酸鹽和乙酸鹽,因為即使再很高比例的有機(jī)溶劑中它們也有很好的溶解性。避免使用磷酸鹽及其他低溶解性緩沖鹽,以防析出堵塞色譜柱。對于大多數(shù)分析樣品,推薦的緩沖鹽濃度為5-20mM。避免使用其他非揮發(fā)性緩沖鹽、TFA或者離子對試劑,它們會干擾HILIC分離機(jī)理,并抑制MS信號。通常的HILIC應(yīng)用中,一般使用50-95%濃度乙腈的水溶性緩沖鹽,如甲酸鹽、乙酸鹽或者它們的酸作為流動相。流動相使用前請務(wù)必進(jìn)行脫氣。

 

6.色譜柱的保養(yǎng)

pH NH2柱可在pH2 ~7.5范圍內(nèi)使用,為保持色譜柱良好的壽命,請避免較強(qiáng)的酸或堿性樣品或者流動相進(jìn)入色譜柱。

●耐壓 NH2柱耐受壓力為20MPa,HP 系列耐壓為50MPa 但是正常的壓力建議控制在耐受壓力的2/3以下。長時間在高壓下運行會對色譜柱造成難以修復(fù)的損害,因此系統(tǒng)壓力升高之后,建議盡快排查系統(tǒng),如果是色譜柱壓力升高,請及時采用適當(dāng)溶劑沖洗色譜柱。

●溫度 最高操作溫度為60℃,長時間在高溫下操作會顯著降低色譜柱壽命。

●沖洗

正相模式清洗步驟:

1. 每次清洗都用低流速起步,當(dāng)檢測到柱壓穩(wěn)定在-定水平后再增加流速;

2. 先用10倍柱體積不含其它添加劑的流動相中的弱溶劑,如正己烷、氯仿等沖洗色譜柱;

3. 50柱體積的諸如乙酸乙酯,二氯甲烷或異丙醇等流動相中的強(qiáng)溶劑沖洗色譜柱。

HILIC模式清洗步驟:

1. 如果是采用緩沖鹽流動相的情況下,做樣之前請務(wù)必用比緩沖鹽稍高比例的水充分過渡,然后再用流動相平衡;

2.每天做樣完畢之后,應(yīng)充分沖洗色譜柱,首先用稍高比例的水相沖洗,例如乙腈/=6040 (v/v)沖洗20倍柱體積,然后用乙腈/=955 (v/v)沖洗20倍柱體積,然后保存在這個流動相下。

●儲存 色譜柱長期不用,建議沖洗方法完成之后,正相分離模式保存在與出廠封存溶劑相同的流動相中;HILIC分離模式保存在存純乙腈中,之后卸掉色譜柱,兩端用堵頭密封,并放在溫度變化小的場所。


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